ELISA，即酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），自1971年由Engvall等人首次提出以来，逐渐成为生物医疗研究中不可或缺的工具。作为基于免疫反应的技术，ELISA以固相免疫测定形式，有效检测体液中微量且重要的生物标志物。在免疫荧光和放射免疫技术之后，ELISA凭借其独特优势迅速崛起，并在临床检验领域占据了关键地位，成为生物学和医学科学研究的重要工具。本文将探讨ELISA的基本原理、分类及其主要技术方法，帮助对ELISA实验有疑惑的同学们揭开其神秘面纱。

ELISA基本原理

ELISA是一种高灵敏度的实验方法，其基本原理是利用抗原与抗体之间的特异性反应，结合酶对底物的催化作用，检测靶蛋白的含量。在实验中，抗原或捕获抗体被固定在固相载体上，通过酶或荧光基团作为检测分子，将化学信号转化为电信号，最终以OD值或发光值的结果对靶蛋白进行定量分析。

ELISA的分类

ELISA用于同时检测抗原和抗体，依据实验原理与操作方式的不同，主要分为四类：直接法、间接法、夹心法和竞争法。

1. 直接法（Direct ELISA）

直接法是将抗原或抗体固定在酶标板上，然后通过带有酶标记的一级抗体或一级抗原进行结合，通过酶催化底物显色，以测定总靶标蛋白的含量。

2. 间接法（Indirect ELISA）

间接法常用于抗体的检测。在此方法中，抗原被固定在酶标板上，加入与之特异性结合的一抗，然后加入带有酶标记的二抗，最后以底物反应显色，从而测定总靶标蛋白的含量。

3. 夹心法（Sandwich ELISA）

夹心法适用于检测具有多个识别位点的大分子蛋白，包括双抗体夹心法和双抗原夹心法。双抗体夹心法中，固定抗体后加入待测抗原，再用酶标抗体检测，并显色以测定靶蛋白的含量。而双抗原夹心法则将固相抗原和酶标特异性抗原用以替代固定抗体和酶标特异性抗体，以检测样品中的抗体。

4. 竞争法（Competitive ELISA）

竞争法适合测定小分子物质，其原理是标本中的抗原与一定量的酶标抗原竞争性结合固相抗体，抗原含量越多，结合在固相上的酶标抗原就越少，从而导致显色减弱。显色结果与待检抗原含量成反比。

四种ELISA方法的比较

在临床诊断中，ELISA作为检测标志性抗体的重要手段，各种方法各有优劣：

• 直接法：灵敏度高，经济实用，但存在交叉反应风险。
• 间接法：步骤少、检测速度快，避免了交叉反应，但灵敏度较低。
• 夹心法：高灵敏、高特异性，适用于复杂样本，但对抗体的配对要求较高。
• 竞争法：适用于小分子抗原，但灵敏度相对较低。

了解ELISA的基本原理、分类及各个方法的特点，对于选择合适的检测方案至关重要。这将有效提高实验的准确性和效率，让您在生物医疗领域走在前沿。更多ELISA实验相关的信息，敬请关注尊龙凯时！